Puesto que el Viernes no dio tiempo a hacer ningún lavado con fijador y guardemos nuestro tubo en el frigorífico con el carnoy, lo sacaremos y hoy continuaremos con los lavados que nos faltaron.
MATERIAL:
- Centrífuga
- Carnoy
- Tripsina
- Pipetas y prepipetas
- Pipetas pasteur
- Matraces
- Tinción giemsa
- Portaobjetos
- Funda para el portaobjetos
- Vasos de precipitado
- Solución tampón
PROCESO:
- Centrifugamos nuestro tubo durante 5 min a 1000rpm.
- Retiramos el sobrenadante.
- Añadimos 1mL de carnoy, resuspendemos, y añadimos otros 4mL de carnoy, volvemos a resuspender.
- El proceso de el punto 1 al 3 lo repetimos en cuatro ocasiones.
- Una vez que hemos terminado los lavados, centrifugamos el tubo y retiramos sobrenadante, dejando 0.5mL, resuspendemos bien.
- Mojamos el portaobjetos, limpio y correctamente, con agua fría.
- Dejamos caer sobre el porta objetos 4 o 5 gotas con una pipeta pasteur de la suspensión de núcleos a una distancia de 5-10 cm de altura en el centro de el porta y se deja resbalar la gota inclinando el porta para que extienda por toda la superficie
- Esperamos a que se seque.
- Mis compañeros prepararon la solución de bandeo, para ello la tripsina venia en una pastilla, la pastilla se disolvió en un litro de agua, aunque se disolvió en algo menos de el litro y luego se añadió el litro completo. De ahí se cogieron 40mL y se mezclaron con 40mL de buffer.
- Sobre el papel de trabajo preparamos un vaso de precipitado con la tripsina, otro vaso de precipitado con solución tampón pH 6.8, un vaso con la tinción giemsa y otro con agua fría.
- Se introduce en el vaso de tripsina el portaobjetos y inmediatamente después se introduce en el vaso de la solución tampón, luego en el vaso de la tinción giemsa durante dos min y después lo introducimos en agua fría.
- Dejamos secar el porta objetos.
OBSERVACIONES:
En nuestro grupo pudimos hacer tres portaobjetos.
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