Extracción de ADN en Sangre Periférica

OBJETIVO

Aprender a aislar el ADN de una muestra que en este caso es de sangre, al ser la más común, evitando la contaminación.

MATERIALES

• Muestra de sangre
• Tampón de lisis (Tris-HCl 10mM, MgCl2 5mM, Sacarosa 0.32M, Tritón-X100 1%)
• NaCl 0.9%
• SDS 20%
• Proteinasa K
• Tubo cónico
• Agua biología molecular

PROCEDIMIENTO

1. Lo primero que vamos ha hacer es preparar el NaCl de 4M, 3.5g , añadimos agua de biología molecular hasta 10mL y disolvemos con un agitador magnético, lo dejamos a temperatura ambiente hasta su uso
   
2. Partimos de 2 mL de sangre periférica en EDTA 
3. Añadimos 10 mL de tampón de lisis y mezclamos por inversión 
4. Dejamos en la nevera 30 min 
5. Centrifugación 15 min a 2500 rpm, retiramos sobrenadante por decantación
6. Añadimos NaCl 0.9% hasta 4 mL y disolvemos el pellet
7. Centrifugar 15 min po a 2500 rpm 
8. Eliminar sobrenadante por decantación
9. Añadir 160 μL de taampón de lisis, 25 μL de SDS 20% y 2.5 μL de Proteinasa K y agitamos con vortex
10. Incubar a temperatura ambiente toda la noche 

OBSERVACIONES

Con el fin de obtener un mejor resultado se dejaron 35 minutos en vez de 30 el tubo con la sangre y el tampón de Lisis.