Extracción ADN de la Saliva

OBJETIVO

Extraer nuestro ADN para que lo podamos trabajar con él en la siguiente práctica.

MATERIALES

• Solución de Lisis
• Proteinasa K 
• Solución de Acetato de Sodio 
• Etanol absoluto
• Tubo ependorf
• Tubo de centrífuga
• Pipeta pasteur
• Asas de siembra
• Pipetas graduadas y puntas
• Agua de biología molecular

PROCEDIMIENTO 

1. Obtenemos la muestra de saliva, para ello nos enjuagamos antes con agua, luego nos rascamos un poco la mucosa bucal y la lengua con un asa de siembra para una mayor cantidad de ADN y nos enjuagamos con suero fisiológico.
2. Recogemos  10 mL de saliva con el suero fisiológico en un tubo cónico, nos ayudamos de un embudo.
3. Añadimos 1 mL de Solución de Lisis al tubo con la muestra.
4. Mezclamos por inversión.
5. Con la micropipeta añadimos 20 μL de Proteinasa K, para ello apoyamos la pipeta en la pared del tubo y dejamos que el líquido resbale.
6. Mezclamos por inversión.
7. Incubamos durante 10 minutos y agitamos cada 3 minutos.
8. Añadimos 200 μL de Acetato de Sodio, mezclamos por inversión.
9. Con una pipeta pasteur añadimos 3 mL de Etanol, que tiene que estar bien frío. Apoyamos la pipeta en la pared del tubo y dejamos que el líquido resbale lentamente.
10. Incubamos durante 2 min sin moverlo.
11. Mezclamos por inmersión muy lentamente.
12. Nos aparece una madeja de ADN que capturaremos con un asa de siembra y llevaremos a un eppendorf.
13. Para conservar el ADN para otro día llenamos el eppendorf con tampón de hidratación y metemos en el congelador.

OBSERVACIONES

Después de obtener la saliva con el suero fisiológico centrifugamos hasta obtener un pellet y después continuamos con el protocolo disolviendo el pellet todo lo posible por inversión, pero finalmente obtuvimos el ADN.