Tinción de Azul Tripán en Hibridomas

El objetivo de esta práctica es hacer un control sobre la situación en la que se encuentra nuestro cultivo de células hídridas.
Para ello realizaremos una tinción de azul tripán como para las células de insecto.

MATERIALES:

•  Nuestro T25
• Azul Tripán
• Cámara de recuento celular 
• Microscopio
• Tubo ependorff.
• Micropipeta

PROCEDIMIENTO:

1. Cogemos el frasco de cultivo de la cámara de incubación.

2. Pipeteamos arriba y abajo 3 veces y dispersamos las células para obtener una suspensión de células individuales. 

3. Transferir 20 µl de suspensión dentro de un tubo ependorff. 

4. Añadir 20 µl de azul Tripán.

7. Transferir 10 µl de células manchadas de azul Tripán a un laterar de la cámara de neubauer.

8.Las observamos a el microscopio y realizamos el conteo.

9.Por otro lado retiramos el sobrenadante de nuestro cultivo y añadimos medio fresco, de la misma manera que lo hicimos con nuestro cultivo de células de insecto, y de igual forma lo introducimos de nuevo en la centrífuga.