Recuento de Células

El objetivo de la practica de hoy es entender como se procede a contar células en una cámara de neubauer para poder aplicarlo posteriormente en nuestras prácticas de cultivos celulares.

MATERIALES:

•  Frasco celular T25. 
• Azul Tripán. 
• Cámara de recuento celular. 
• Microscopio.
• Tubo ependorff.
• Micropipeta de 10µl

PROCEDIMIENTO:

1. Cojemos el frasco de cultivo de la cámara de incubación.

2. Pipeteamos arriba y abajo 3 veces y dispersamos las células para obtener una suspensión de células individuales. 

3. Transferir 20 µl de suspensión dentro de un tubo ependorff. 

4. Añadir 20 µl de azul Tripán. El azul es un colorante que mancha las células muertas y no las células vivas. 

5. Mezclar bien pipeteando arriba y abajo tocando el fondo del tubo.

6. Transferir 10 µl de células manchadas de azul Tripán a un laterar de la cámara de neubauer.

7.Un aspecto muy a tener en cuenta a la hora de observar las células para el contaje no puede ser otro que el manejo de el microscopio para poder visualizarlas lo mejor posible, a la hora de visionar las células tenemos que tener en cuenta:

• El microscopio a de estar al 10x10, es decir 10 en ocular y al 10 de objetivo
• El diafragma medio cerrado
• El condensador bajado, no debe emitir mucha luz sobre nuestra muestra, ya que el calor de esta podría afectarle
  

La imagen representa más o menos que nos encontraremos al observar nuestra cámara de neubauer y las flechas la dirección al contar las células, esta imagen muestra un cuadro de los cuatro que podemos contar en la cámara. 
9.Una vez contados nuestros cuadros pasaríamos a calcular la concentración de células/ml.