Determinación de la Pureza del ADN : Espectrofotómetro

OBJETIVO

Aprender a usar el espectrofotómetro y medir la pureza de nuestro ADN genómico de la anterior práctica.

MATERIALES

• ADN genómico
• Tris HCl (pH 8)
• EDTA 0.001M

PROCEDIMIENTO

1. Encendemos el espectofotómetro 10-20 minutos antes de empezar a medir 
2. Preparamos 4 mL TE, mezclando 2 mL de EDTA y 2 mL de agua destilada
3. Añadimos en un tubo de ensayo 1 mL de TE, más 50 μL de muestra de ADN purificada y resuspender y por último 1.45 mL más de TBE y mezclar
4. Colocar el espectrofotómetro a una λ=260 nm
5. Ponemos ''el blanco'' con tampón de TBE en una cubeta, esto sirve para no tener en cuenta la absorbancia que no sea de ADN 
6. Medimos la dilución del punto 3
7. Anotamos la absorbancia 
8. Sacamos la muestra del espectofotómetro
9. Modificamos la absorbancia a una λ= 280 nm
10. Repetimos los pasos 5, 6, 7, 8
11. Modificamos la absorbancia a una λ= 230 nm
12. Repetimos los pasos 5, 6, 7, 8
13. Realizamos los cálculos pertinentes para determinar la pureza

OBSERVACIONES

No tocar las paredes que debe de atravesar la luz en la cubeta y también vigilar que esta no esté rallada.