Extracción de ADN Genómico

OBJETIVO

Aprender a obtener una rápida extracción y purificación de ADN genómico de alta calidad a partir de sangre total utilizando Spin columnas con membrana de silica que une selectivamente el ADN

MATERIALES

• 900 μL Tampón de Lisis
• 300 μL de sangre total
• 180 μLTampón de Lisis de Tejidos
• 25 μL de Proteinasa K 
• 200 μL Tampón de Lisis/unión
• 200 μL etanol
• MicroSpin columna y varios tubos de recolección 
• 500 μL Tampón de Deshinibición
• 1 mL Tampón de Lavado
•  200 μL Tampón Elución 
• Tubos eppendorff

PROCEDIMIENTO

1. Pipeteamos 300 μL de sangre en un microtubo de 1.5 mL y añadimos 900 μL de Tampón de Lisis, mezclándolo con un vortex e incubándolo 10 minutos a temperatura ambiente
2. Se centrifuga a la máxima potencia durante un minuto y quitamos el sobrenadante por decantación, dejando 10μL-20 de líquido residual y después vortex
3. Añadimos 180 μL de Tampón de Lisis de Tejidos más 25 μL de Proteinasa K y mezclamos con un votex 2 o 5 segundos
4. Incubar a 56ºC durante 10 minutos 
5. Añadimos 200 μL de Tampón de Lisis/unión, mezclamos con vortex e incubamos a 70ºC durante 10 minutos
6. Añadimos 200 μL de Etanol (96%-100%) y mezclamos con vortex
7. Ahora lo pasamos a MicroSpin columna 
8. Centrifugamos a 8000 rpm durante 60 segundos eliminamos el tubo y ponemos un nuevo tubo de recolección  

OBSERVACIONES

El protocolo no acaba aquí pero en nuestro caso lo continuaremos al día siguiente, quedándonos en el paso 8.